使用(yong)(yong)方法(fa)：1、细(xi)胞培(pei)(pei)养(yang)器(qi)(qi)皿(min)的(de)表面(mian)包被(bei)：以包被(bei)浓(nong)度为(wei)(wei)2μg/cm2为(wei)(wei)例，用(yong)(yong)无菌0.006mol/L乙(yi)酸将胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)蛋(dan)白稀(xi)释(shi)到(dao)0.012mg/mL。加(jia)(jia)到(dao)相应(ying)的(de)培(pei)(pei)养(yang)器(qi)(qi)皿(min)中(zhong)，确保胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)蛋(dan)白溶液铺满器(qi)(qi)皿(min)的(de)表面(mian)。开盖在(zai)超净台上过(guo)夜晾(liang)干(gan)，也可以在(zai)室(shi)温放(fang)置1小时后(hou)(hou)，用(yong)(yong)PBS洗3~4次(ci)后(hou)(hou)直接使用(yong)(yong)。包被(bei)好的(de)器(qi)(qi)皿(min)在(zai)4~25℃至少可保存三(san)个月以上的(de)时间。2、三(san)维(wei)(wei)胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)凝胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)的(de)制(zhi)备(bei)：A、无细(xi)胞三(san)维(wei)(wei)胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)凝胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)的(de)制(zhi)备(bei)（以配(pei)(pei)制(zhi)1mg/mL三(san)维(wei)(wei)胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)1mL为(wei)(wei)例）将200μL本(ben)品加(jia)(jia)到(dao)置于冰(bing)浴(yu)的(de)离(li)心管中(zhong)，加(jia)(jia)入(ru)690μL双蒸(zheng)水，然后(hou)(hou)加(jia)(jia)到(dao)12μL0.1mol/LNaOH中(zhong)（如(ru)果反过(guo)来把12μL0.1mol/LNaOH加(jia)(jia)到(dao)胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)溶液中(zhong)，会(hui)由于NaOH不能(neng)迅速混(hun)匀(yun)(yun)而产生局部的(de)胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)凝结），立即(ji)混(hun)匀(yun)(yun)。再加(jia)(jia)入(ru)100μL10×PBS或(huo)10×培(pei)(pei)养(yang)液，混(hun)匀(yun)(yun)后(hou)(hou)立即(ji)加(jia)(jia)到(dao)培(pei)(pei)养(yang)器(qi)(qi)皿(min)中(zhong)（混(hun)匀(yun)(yun)后(hou)(hou)pH为(wei)(wei)7左右，如(ru)果PBS或(huo)培(pei)(pei)养(yang)液中(zhong)没有加(jia)(jia)酚红，初(chu)次(ci)使用(yong)(yong)时需(xu)要测定(ding)pH值）。将培(pei)(pei)养(yang)器(qi)(qi)皿(min)在(zai)室(shi)温放(fang)置20min待胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)凝固(gu)后(hou)(hou)，转(zhuan)移(yi)到(dao)培(pei)(pei)养(yang)箱内。如(ru)果配(pei)(pei)制(zhi)中(zhong)使用(yong)(yong)的(de)是10×PBS，使用(yong)(yong)前需(xu)要加(jia)(jia)入(ru)适当体积的(de)细(xi)胞培(pei)(pei)养(yang)液预平衡。成功(gong)建(jian)立了(le)利用(yong)(yong)自(zi)制(zhi)鼠尾(wei)胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)培(pei)(pei)养(yang)大鼠耳蜗边(bian)缘细(xi)胞的(de)方法(fa)，并且制(zhi)作简便,成本(ben)低廉(lian)。珠海鼠尾(wei)胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)厂家

鼠(shu)尾(wei)(wei)胶(jiao)原是一种天然(ran)培(pei)(pei)养基和一种天然(ran)的(de)黏附剂(ji)，可(ke)用于(yu)细胞培(pei)(pei)养皿的(de)包被，特别适合普通细胞培(pei)(pei)养器皿不易贴壁细胞的(de)培(pei)(pei)养；也可(ke)用于(yu)制备(bei)三维(wei)胶(jiao)原凝胶(jiao)，使(shi)细胞在模拟的(de)三维(wei)环(huan)境(jing)中(zhong)生(sheng)长(zhang)。制备(bei)鼠(shu)尾(wei)(wei)胶(jiao)原方法：1、取(qu)大鼠(shu)尾(wei)(wei)巴(ba)洗净(jing)，75%酒精浸泡5分(fen)钟(zhong)；2、手持(chi)尾(wei)(wei)巴(ba)，用止(zhi)血钳夹住鼠(shu)尾(wei)(wei)的(de)较高，折(zhe)断(duan)尾(wei)(wei)骨后(hou)拉(la)出尾(wei)(wei)腱(jian)；3、将尾(wei)(wei)腱(jian)剪(jian)断(duan)置于(yu)平皿中(zhong)，生(sheng)理盐水(shui)浸泡；4、重(zhong)复步骤2、3，直至(zhi)尾(wei)(wei)腱(jian)量够用；5、吸去生(sheng)理盐水(shui)，将尾(wei)(wei)腱(jian)称重(zhong)（0.5-1克）；6、将尾(wei)(wei)腱(jian)置于(yu)平皿内剪(jian)碎(sui)，转移至(zhi)三角烧(shao)瓶中(zhong)；7、按(an)每克尾(wei)(wei)腱(jian)50ml的(de)比例，加(jia)入0.1%醋(cu)酸溶液(ye)；8、摇晃(huang)，使(shi)尾(wei)(wei)腱(jian)分(fen)散于(yu)醋(cu)酸溶液(ye)中(zhong)，4℃放(fang)置一星(xing)期；9、离心(xin)，4000转/分(fen)，10-15分(fen)钟(zhong)；10、吸取(qu)上(shang)清，分(fen)装成小(xiao)瓶，4℃保(bao)存。天津鼠(shu)尾(wei)(wei)胶(jiao)原生(sheng)产(chan)厂家胶(jiao)原蛋白（Collagen）是结缔组织(zhi)和内脏(zang)部(bu)位(wei)外(wai)基质的(de)主要成分(fen)。

一种(zhong)基(ji)(ji)于(yu)(yu)鼠(shu)(shu)尾(wei)(wei)(wei)(wei)胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)(bai)：1.一种(zhong)基(ji)(ji)于(yu)(yu)鼠(shu)(shu)尾(wei)(wei)(wei)(wei)胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)(bai)制备(bei)的(de)可吸(xi)收止(zhi)血材(cai)料，为(wei)鼠(shu)(shu)尾(wei)(wei)(wei)(wei)胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)(bai)、聚(ju)(ju)乙烯(xi)醇(chun)、壳(qiao)(qiao)聚(ju)(ju)糖、水(shui)(shui)制成的(de)冻干止(zhi)血材(cai)料，各材(cai)料重(zhong)(zhong)量配(pei)(pei)比为(wei)鼠(shu)(shu)尾(wei)(wei)(wei)(wei)胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)(bai)聚(ju)(ju)乙烯(xi)醇(chun)壳(qiao)(qiao)聚(ju)(ju)糖为(wei)1-10%0.2-5%0.2-2%，余量为(wei)水(shui)(shui)。2.根据权(quan)利要求1所述的(de)基(ji)(ji)于(yu)(yu)鼠(shu)(shu)尾(wei)(wei)(wei)(wei)胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)(bai)制备(bei)的(de)可吸(xi)收止(zhi)血材(cai)料，其特征(zheng)在(zai)于(yu)(yu)冻干止(zhi)血材(cai)料中，各材(cai)料重(zhong)(zhong)量配(pei)(pei)比为(wei)鼠(shu)(shu)尾(wei)(wei)(wei)(wei)胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)(bai)聚(ju)(ju)乙烯(xi)醇(chun)壳(qiao)(qiao)聚(ju)(ju)糖为(wei)5%2%1%，余量的(de)水(shui)(shui)。3.根据权(quan)利要求1或(huo)2所述的(de)基(ji)(ji)于(yu)(yu)鼠(shu)(shu)尾(wei)(wei)(wei)(wei)胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)(bai)制备(bei)的(de)可吸(xi)收止(zhi)血材(cai)料，其特征(zheng)在(zai)于(yu)(yu)鼠(shu)(shu)尾(wei)(wei)(wei)(wei)胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白(bai)(bai)来源于(yu)(yu)各品(pin)系(xi)SFP级大鼠(shu)(shu)鼠(shu)(shu)尾(wei)(wei)(wei)(wei)。

生(sheng)物医用(yong)(yong)鼠尾胶原蛋(dan)白(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)提(ti)取方法(fa)，采用(yong)(yong)酸(suan)法(fa)与(yu)酶(mei)法(fa)相结合的(de)(de)(de)(de)(de)工艺，保持(chi)恒低温无(wu)菌的(de)(de)(de)(de)(de)环(huan)境，利用(yong)(yong)同样浓(nong)度(du)的(de)(de)(de)(de)(de)盐溶液进行两次(ci)盐析与(yu)离(li)心，简化了提(ti)纯步骤。所(suo)用(yong)(yong)酸(suan)为低浓(nong)度(du)酸(suan)溶液，并(bing)采用(yong)(yong)柠檬酸(suan)替代醋酸(suan)进行提(ti)纯。从提(ti)取原料(liao)到(dao)(dao)样品生(sheng)成过(guo)程中，进行多次(ci)真空冷冻干(gan)燥，并(bing)经进一步处理(li)获得(de)含水率在3％以(yi)下的(de)(de)(de)(de)(de)胶原蛋(dan)白(bai)微粉；较后(hou)由灭菌、无(wu)菌包装(zhuang)，成品胶原蛋(dan)白(bai)粉末的(de)(de)(de)(de)(de)纯度(du)在98％以(yi)上(shang)。本(ben)发(fa)明获得(de)的(de)(de)(de)(de)(de)胶原蛋(dan)白(bai)降低了蛋(dan)白(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)免疫原性，提(ti)高了产率和生(sheng)物相容性，降低了成本(ben)，适用(yong)(yong)于(yu)生(sheng)物医用(yong)(yong)材料(liao)，所(suo)得(de)到(dao)(dao)的(de)(de)(de)(de)(de)胶原蛋(dan)白(bai)能完整地(di)保留(liu)其特有的(de)(de)(de)(de)(de)三股螺旋结构。鼠尾胶原醋酸(suan)溶解：稀释一定数(shu)量的(de)(de)(de)(de)(de)胶原溶液。

鼠尾(wei)胶(jiao)原(yuan)(yuan)胶(jiao)凝程序：胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋(dan)白(bai)I按以(yi)下步骤使其(qi)pH达到(dao)碱性时凝胶(jiao)。1）将(jiang)无(wu)菌5cm左右(you)的(de)(de)(de)(de)纱布(bu)海绵(mian)贴(tie)在(zai)(zai)150mm培(pei)(pei)养(yang)(yang)皿(min)的(de)(de)(de)(de)盖(gai)(gai)子(zi)上来制(zhi)备氨蒸气(qi)室。用(yong)氢(qing)氧化铵使纱布(bu)饱和(he)，把盖(gai)(gai)子(zi)放在(zai)(zai)150mm的(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)养(yang)(yang)皿(min)上，暂(zan)放置一边(bian)。2）将(jiang)胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋(dan)白(bai)I均(jun)匀涂(tu)(tu)布(bu)在(zai)(zai)要(yao)(yao)包被物(wu)的(de)(de)(de)(de)表面上，厚度(du)可以(yi)根据需要(yao)(yao)改(gai)变，胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋(dan)白(bai)I（50-100μL）足以(yi)涂(tu)(tu)覆22mm的(de)(de)(de)(de)盖(gai)(gai)玻(bo)片(pian)(pian)。对(dui)于直径100mm的(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)养(yang)(yang)皿(min)，每个加(jia)(jia)(jia)入约6mL;对(dui)于60mm培(pei)(pei)养(yang)(yang)皿(min)添加(jia)(jia)(jia)约2.3mL，对(dui)于35mm培(pei)(pei)养(yang)(yang)皿(min)添加(jia)(jia)(jia)约1mL。3）将(jiang)涂(tu)(tu)有(you)胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋(dan)白(bai)的(de)(de)(de)(de)盖(gai)(gai)玻(bo)片(pian)(pian)或带有(you)盖(gai)(gai)子(zi)的(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)养(yang)(yang)皿(min)转移(yi)到(dao)氨蒸气(qi)室并暴(bao)露三分钟。4）在(zai)(zai)无(wu)菌蒸馏(liu)水中(zhong)（35mm培(pei)(pei)养(yang)(yang)皿(min)加(jia)(jia)(jia)5mL，60mm培(pei)(pei)养(yang)(yang)皿(min)加(jia)(jia)(jia)10mL等）浸泡涂(tu)(tu)布(bu)的(de)(de)(de)(de)盖(gai)(gai)玻(bo)片(pian)(pian)或培(pei)(pei)养(yang)(yang)皿(min)30min。吸取原(yuan)(yuan)蒸馏(liu)水并加(jia)(jia)(jia)0.5-1.0mL无(wu)菌蒸馏(liu)水，放置在(zai)(zai)层流罩(zhao)中(zhong)过(guo)夜。5）吸出(chu)蒸馏(liu)水，用(yong)含血清的(de)(de)(de)(de)平衡盐(yan)缓冲液溶液代替并保存在(zai)(zai)2-8°C。鼠尾(wei)胶(jiao)原(yuan)(yuan)蛋(dan)白(bai)还能用(yong)于制(zhi)备三维胶(jiao)。开(kai)封鼠尾(wei)胶(jiao)原(yuan)(yuan)直销厂家

鼠尾胶(jiao)原蛋白 型在浓度1mg/ml 以上， pH 左右时可形成具有一定强度三维胶(jiao)。珠海鼠尾胶(jiao)原厂家

胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原蛋(dan)(dan)白(bai)的(de)(de)(de)提(ti)取(qu)(qu)(qu)方(fang)(fang)法(fa)：1.碱(jian)法(fa)提(ti)取(qu)(qu)(qu)：碱(jian)法(fa)提(ti)取(qu)(qu)(qu)胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原蛋(dan)(dan)白(bai)常(chang)用(yong)的(de)(de)(de)处理剂为石灰、氢氧(yang)化(hua)(hua)钠、碳酸钠等。如Holzer等[5]采用(yong)1%～1.5%石灰水浸泡的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)提(ti)取(qu)(qu)(qu)胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原蛋(dan)(dan)白(bai)。由于它(ta)容易造成(cheng)肽键(jian)水解(jie)，因此得到的(de)(de)(de)水解(jie)产物分子量(liang)比较低。所以(yi)，若想(xiang)保留胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原的(de)(de)(de)三股(gu)螺旋结构，此法(fa)不可取(qu)(qu)(qu)。2.盐法(fa)提(ti)取(qu)(qu)(qu)：盐法(fa)提(ti)取(qu)(qu)(qu)胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原蛋(dan)(dan)白(bai)所用(yong)的(de)(de)(de)中性盐有盐酸-三羟甲(jia)基胺(an)基甲(jia)烷(Tris-HCl)、氯化(hua)(hua)钠、柠檬酸盐等。在中性条件(jian)下，当盐的(de)(de)(de)浓(nong)度达(da)到一定量(liang)时，胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原溶解(jie)。并且(qie)可采用(yong)不同(tong)浓(nong)度的(de)(de)(de)氯化(hua)(hua)钠对提(ti)取(qu)(qu)(qu)的(de)(de)(de)胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原蛋(dan)(dan)白(bai)进行盐析(xi)处理，可以(yi)沉淀(dian)出不同(tong)类型(xing)的(de)(de)(de)胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原蛋(dan)(dan)白(bai)。珠海(hai)鼠尾胶(jiao)(jiao)(jiao)(jiao)原厂家

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